YEMOQ. Chudinov, V.A. Platonov, A.V. Alexandrova, S.N. Elanskiy
Yaqinda iskion qo'ziqoroni Ilyonectria crassa qo'ziqorini kartoshka ildiz mevalarini yuqtirishga qodir ekanligi ko'rsatildi. Ushbu asar birinchi bo'lib kartoshkadan ajratilgan I. crassa shtammining biologik xususiyatlarini va ba'zi fungitsidlarga chidamliligini tahlil qiladi. "Kartoshka" shtammining turlarga xos mintaqalari ketma-ketligi ilgari za'faron, jenshen, aspen va olxa, zambaklar va lola barglari ildizlaridan ajratilgan zamburug'lar uchun olingan vaqtga to'g'ri keldi. Ko'rinib turibdiki, ko'plab yovvoyi va bog 'o'simliklari I. crassa zaxirasi bo'lishi mumkin. Tekshirilgan shtamm pomidor va kartoshka bo'laklarini yuqtirgan, ammo butun pomidor mevalari va buzilmagan kartoshka tupini yuqtirmagan. Bu I. crassa yara paraziti ekanligini ko'rsatadi. Fludioxonil, difenokonazol va azoksistrobinga qarshilikni ozuqaviy muhitda baholash ushbu dorilarning yuqori samaradorligini ko'rsatdi.
EC50 indikatori (fungitsidni boshqarish bilan taqqoslaganda koloniyaning radial o'sish tezligini 2 baravar sekinlashtiradigan fungitsid konsentratsiyasi) 0.4 ga teng; Navbati bilan 7.4 va 4 mg / l. Kartoshka ildiz mevalarini fitopatologik baholashda va o'simliklarni himoya qilish tadbirlarini ishlab chiqishda I. crassa keltirib chiqaradigan kasallikning rivojlanish ehtimoli hisobga olinishi kerak.
Fitopatogen mikroorganizmlarning rivojlanishi kartoshkani etishtirish va saqlashning barcha bosqichlarida katta yo'qotishlarga olib keladi. Himoya choralarini rejalashtirishda, qoida tariqasida, Alternaria, Fusarium, Foma, Helminthosporium, Colletotrichum, Phytophthora va boshqalar kabilarning taniqli patogenlari hisobga olinadi, ammo so'nggi yillarda kartoshkada yangi fitopatogen mikroorganizmlarning paydo bo'lishi haqida xabarlar ko'paymoqda. Ularning biologiyasi yaxshi o'rganilmagan, kartoshkada ularga nisbatan ishlatiladigan fungitsidlarning samaradorligi noma'lum, diagnostika usullari ishlab chiqilmagan. Ommaviy rivojlanish bilan ular kartoshka hosiliga katta zarar etkazishi mumkin. Ushbu mikroorganizmlardan biri mualliflar tomonidan birinchi marta kartoshka ildiz mevalari ustida kashf etilgan asionik qo'ziqorin Ilyonectria crassa (Wollenw.) A. Cabral & Crous (Chudinova va boshq., 2019).
Ushbu ishda kartoshka ildiz mevalaridan ajratilgan I. crassa shtammini tahlil qilish natijalari keltirilgan. I. crassa koloniyalarining va mitseliy tuzilmalarining morfologiyasi, turlarga xos DNK mintaqalarining nukleotidlar ketma-ketligi, kartoshka va pomidorga zaharliligi va ba'zi mashhur fungitsidlarga chidamliligi o'rganildi.
Materiallar va uslublar
Biz Kostroma viloyatida yetishtirilgan yuqtirilgan kartoshka tuberkasidan 18 yilda ajratilgan I. crassa 2KSuPT2018 shtammidan foydalandik. Tubga och jigarrang miselyum bilan qoplangan bo'shliq bilan quruq chirish turi ta'sir ko'rsatdi. Steril dissektsiya ignasi yordamida qo'ziqorin mitseliyasi Petri idishiga agar muhiti bilan (pivo suti 10%, agar 1.5%, penitsillin 1000 U / ml) o'tkazildi. Plitalar qorong'ida 24 ° S haroratda inkübe qilingan.
ICC2500 HD raqamli kamerasi bo'lgan Leica DM50 yorug'lik mikroskopi va IC80HD raqamli kamerasi bo'lgan Leica M80 durbinli mikroskopi (Leica Microsystems, Germaniya) fotosuratlar, sporalar va sporalar organlarining o'lchamlari va morfologiyasini baholash uchun ishlatilgan.
DNKni ajratish uchun zamburug'li miselyum suyuq no'xat muhitida o'stirildi, so'ngra suyuq azotda muzlatib, bir hil holga keltirildi, CTAB tamponida inkübe qilindi, xloroform bilan tozalangan va 2% spirt bilan ikki marta yuvilgan.
DNK olish usuli Kutuzova va boshqalarning maqolasida batafsil tavsiflangan. (2017).
Turlarni molekulyar usullar bilan aniqlash va boshqa taniqli I. crassa shtammlari bilan taqqoslash uchun PCR turlarga xos DNK mintaqalarini kuchaytirishga imkon beradigan primerlar bilan bajarildi: ITS1-5,8S-ITS2 (primerlar ITS5 / ITS4, White va boshq., 1990), gen mintaqalari b. -tubulin (Bt2a / Bt2b, Glass, Donaldson, 1995) va tarjima cho'zilish koeffitsienti 1a (tef1a) (primerlar EF1-728F / EF1-986R, Carbone and Kohn, 1999). Evrogen CleanUp to'plami yordamida jeldan kerakli uzunlikdagi amplikonlar chiqarildi. Kuchaytirilgan mintaqalar BigDye® Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kit (Applied Biosystems, CA, USA) yordamida Amaliy Biosystems 3730 xl avtomatlashtirilgan sekvensiyasida (Applied Biosystems, CA, AQSh) ishlatildi. Natijada paydo bo'lgan nukleotidlar ketma-ketligi AQSh Milliy Biotexnologiya Axborot Markazining (NCBI) GenBank ma'lumotlar bazasida moslikni izlash uchun ishlatilgan. Filogenetik tahlil MEGA 6 dasturi yordamida amalga oshirildi (Tamura va boshq., 2013).
Virusliligini aniqlash yirik mevali pomidor (Dubrava navi) va kartoshka ildiz mevalari (Gala navi) ning butun yashil mevalarida aniqlandi. Bundan tashqari, zararlangan mevalar va ildiz mevalaridagi zararni simulyatsiya qilish uchun biz bir xil mevalar va ildiz mevalaridan bo'laklarni ishlatdik. Ildizlarning bo'laklari nam kameralarga joylashtirildi, ular Petri idishlari bo'lib, pastki qismida nam filtr qog'ozi bo'lgan. Qog'ozga slayd qo'yildi, ustiga navbati bilan ildiz yoki mevalar bo'laklari joylashtirildi. Butun tup va mevalar, shuningdek, pastki qismida nam filtr qog'ozi bo'lgan idishlarga joylashtirildi. Dilim markazida (yoki tup yoki mevaning buzilmagan yuzasida), 5 kunlik wort agarda o'stirilgandan so'ng, qo'ziqorin gifalari bo'lgan agar (5 × 5 mm) bo'lagi joylashtirilgan.
Zamburug'li shtammlarning fungitsidlarga chidamliligini baholash laboratoriya sharoitida agar oziqlantiruvchi muhitda o'tkazildi. Maxim, KS (faol fludioxonil, 25 g / l), Quadris, KS (azoksistrobin 250 g / l), Scor, EC (difenokonazol 250 g / l) fungitsid dorilariga sezuvchanligini o'rgandik (Davlat katalogi ..., 2020). Petri idishlarida wort-agar muhitida, o'rganilgan dori-darmonlarni qo'shib, 0.1 faol moddaning konsentratsiyasida baholash o'tkazildi; bitta; 1 ppm (mg / L) (fludioksonil va difenokonazol uchun), 10; o'nta; 1 ppm (azoksistrobin uchun) va fungitsidsiz vositalarda (nazorat). Fungitsid eritilgan qismga qo'shilib, 10 ° S gacha bo'lgan muhitda sovutiladi, undan so'ng vosita Petri idishlariga quyiladi. Qo'ziqorin mitseliyasi bo'lgan agar blok Petri idishining o'rtasiga joylashtirilgan va qorong'ida 100 ° S haroratda o'stirilgan. 60 kunlik inkubatsiyadan so'ng koloniyalarning diametrlari ikki o'zaro perpendikulyar yo'nalishda o'lchandi; har bir koloniya uchun o'lchov natijalari o'rtacha hisoblangan. Tajribalar uch nusxada bajarilgan. Tahlillar natijalariga ko'ra, EC24, fungitsid konsentratsiyasiga teng ravishda hisoblab chiqildi, bu esa koloniyaning fungitsid nazoratiga nisbatan radial o'sish tezligini ikki baravarga kamaytirdi.
Natijalar va muhokama
Zamburug'li agar bilan petri idishlarida qo'ziqorin oq pufakli miselyum bilan koloniyalar hosil qildi. Miselyum ostidagi vosita qizil-jigar rangga aylandi. O'rtacha quriganida, qo'ziqorin kichik sporodoxiyalarda bitta va birlashtirilgan konidioforalarda ikki turdagi sporalarni hosil qildi. Makrokonidiyalar cho'zilgan, silindrsimon, birdan uchtagacha septa, o'rtacha uzunligi 27.2 umm, qiymatlari oralig'i 23.2 dan 32.2 um gacha, kengligi - 4.9 um gacha (1-rasm). Mikrokonidiyalarning o'rtacha uzunligi 14.3 µm, qiymati 10.3 dan 18.1 µm gacha, kengligi 4.0 µm gacha. Barcha makro va mikromorfologik belgilar Ilyonectria crassa turlarining xilma-xilligiga mos keladi (Kabral va boshq., 2012).
Turlarga xos bo'lgan DNK mintaqalarining ketma-ketliklari (ITS, b-tubulin, TEF 1a) biz ilgari o'rgangan I. crassa shtammlari ketma-ketligiga to'liq to'g'ri keldi (Chudinova va boshq., 2019, 1-jadval). I. crassa ning boshqa mintaqalarda tarqalishini o'rganish va ta'sirlangan madaniyatlarning spektrini tahlil qilish uchun GenBank ma'lumotlar bazasidagi o'xshash DNK sekanslari tahlil qilindi (1-jadval). Qatlam 86 dan 100% gacha bo'lgan. "Kartoshka" I. crassa shtammining barcha uchta DNK mintaqalarining ketma-ketliklari Gollandiyada nilufar lampochka va narsis ildizlaridan va Kanadadagi ginseng ildizidan ajratilgan shtammlarning ketma-ketliklari bilan bir xil edi. Biz ochiq ma'lumotlar bazalarida uchta tahlil qilingan o'xshash ketma-ketlik bilan boshqa I. crassa shtammlarini topa olmadik. Shu bilan birga, yotqizilgan ITS va b-tubulin sekanslarini tahlil qilish Buyuk Britaniyada lola barglarida I. crassa mavjudligini ko'rsatdi. Shu kabi ITS ketma-ketligi bo'lgan qo'ziqorinlar Kanadadagi aspen ildizlari va Italiyadagi olxa ildizlari mikobiota, Saudiya Arabistonidagi kartoshka ildiz mevalari tahlilida aniqlandi (1-jadval). Ushbu tadqiqot natijalari shuni ko'rsatadiki, I. crassa global taqsimotga ega va har xil o'simlik turlarini yuqtirishga qodir.
5-kun pomidor va kartoshka bo'laklaridagi patogenligini aniqlashda zararlanish diametri 1.5 sm ga yetdi, tekshirilgan shtamm butun pomidor mevasini va buzilmagan kartoshka tupini yuqtirmadi. Biroq, sepals pomidorga ta'sir ko'rsatdi. Kontaminatsiya ehtimolini istisno qilish uchun kartoshkaning tuber tilimida hosil bo'lgan miselyumdan qo'ziqorin izolati sof madaniyatga ajratildi. Bu ota-onaning zo'riqishiga to'liq o'xshash edi. Ko'rinib turibdiki, I. crassa - bu yara paraziti.
Fungitsidlar bilan urug 'tuplarini ekishdan oldin davolash vegetatsiya davrida o'simliklarda kasalliklarning rivojlanishini pasaytiradi. Samarali fungitsidlarni tanlash uchun ulardan qaysi biri I. srassaga qarshi samarali ekanligini baholash muhimdir. Ishda fungitsidlarning keng tarqalgan faol moddalari - fludioxonil, azoksistrobin, difenokonazol o'rganildi. Fludioxonil ekishdan oldin urug'lar va urug 'tuplarini kiyintirish uchun ishlatiladigan bir nechta aralashmalar tarkibiga kiradi. Fludioxonil (Maksim) saqlashdan oldin urug 'tuplarini davolash uchun ham ishlatiladi. Difenokonazol va azoksistrobin urug'lik materiallarini qayta ishlash uchun ishlatiladigan bir qator preparatlarga, shuningdek vegetativ o'simliklarni qayta ishlashga mo'ljallangan preparatlarga kiritilgan (Davlat katalogi ..., 2020).
I. crassa ning o'sish sur'ati turli xil faol moddalar konsentratsiyali muhitlarda (2-rasm) o'rganildi: fludioksil (EC50 = 0.4 ppm), azoksistrobin (EC50 = 4 ppm) va difenokonazol (EC50 = 7.4 ppm) (2-jadval). Ushbu preparatlarni I. crassa-ga qarshi yuqori samarali deb hisoblash mumkin, chunki ularning EC50ligi ildiz mevalarni davolash uchun ishlatiladigan ishchi suyuqligidagi preparatning tavsiya etilgan konsentratsiyasidan ancha past. Davlat katalogiga ko'ra ... (2020 yil) kartoshka ildiz mevalarini davolash uchun suyuqlikda fludioksil konsentratsiyasi 500 dan 1000 ppm gacha, azoksistrobin (jo'yak tubini davolash uchun suyuqlikda) - 3750-9375 ppm, difenokonazol (vegetativ o'simliklarni davolash uchun suyuqlikda) - 187.5– 625 ppm.
Jadval 1. Genbank ma'lumotlar bazasida mavjud bo'lgan 18KSuPT2 shtammlari va Ilyonectria crassa shtammlarining turlarga xos sekanslari ketma-ketligining o'xshashligi
Kuchlanish | Xost o'simlik, ajralib chiqadigan joy | GenBank-da saqlangan tartib raqamlari, o'xshashlik darajasi | aloqa | ||
ITS | b-tubulin | TEF 1a | |||
17KSPT1 va 18KSuPT2 | Kartoshka tupi, Kostroma viloyati | MH818326 | MH822872 | MK281307 | Chudinova va boshq., 2019, bu ish |
CBS 158/31 | Narcissus ildizlari, Niderlandiya | JF735276 100 | JF735394 100 | JF735724 99.3 | Kabral va boshq., 2012 |
CBS 139/30 | Lily lampochkasi, Gollandiya | JF735275 100 | JF735393 99.7 | JF735723 99.3 |
|
NSAC-SH-1 | Ginseng ildizi, Kanada | AY295311 99.4 | JF735395 100 | JF735 / 725 99.6 |
|
RHS235138 | Lola barglari, Buyuk Britaniya | KJ475469 100 | KJ513266 100 | ND | Denton, Denton, 2014 yil |
MT294410 | Aspen ildizlari, Kanada | MT294410 100 | ND | ND | Ramsfild va boshq., 2020 yil |
ER1937 | Olxa, Italiya | KR019363 99.65 | ND | ND | Tizzani, Xegi, Motta. To'g'ridan-to'g'ri yuborish |
KAUF19 | Kartoshka tupi, Saudiya Arabistoni | HE649390 98.3 | ND | ND | Gashgari, Gherbavi, 2013 yil |
SH = depozitga kiritilmagan
Jadval 2. Ilyonectria crassa ning fungitsidlarga chidamliligi
(faol modda) | EC50, ppm | ||||
3 kuni | 5 kuni | 7 kuni | |||
nazorat | 17 ± 2 | 33 ± 5 | 47 ± 3 | ||
Kvadris, KS (foksoksistrobin) | 18 ± 1 | 34 ± 2 | 48 ± 2 | ||
11 ± 1 | 11 ± 1 | 12 ± 1 | |||
11 ± 1 | 11 ± 1 | 12 ± 1 | |||
Maksim, KS (fludioxonil) | 16 ± 1 | 28 ± 2 | 48 ± 2 | ||
7 ± 1 | 13 ± 3 | 19 ± 4 | |||
5 ± 1 | 12 ± 1 | 17 ± 5 | |||
Skor, EC (difenokonazol) | 18 ± 1 | 35 ± 2 | 48 ± 1 | ||
11 ± 1 | 24 ± 3 | 35 ± 4 | |||
11 ± 1 | 13 ± 1 | 17 ± 3 |
Bizning ishimizda I. crassa shtammlari Kostroma va Moskva (Chudinova va boshq., 2019) mintaqalaridagi kartoshka ildiz mevalaridan ajratib olindi. I. crassa bilan bir xil bo'lgan ITS ketma-ketligi bo'lgan qo'ziqorin shtammlarining yuqori qismi Saudiya Arabistonidagi kartoshka ildiz mevalari mikobiotasini tahlil qilishda aniqlandi (Gashgari va Gherbawy, 2013). Ko'rinib turibdiki, I. crassa kartoshkada ko'rinadigan darajada kam emas. Bizning tajribalarimiz shuni ko'rsatdiki, qo'ziqorin zararlangan pomidor mevalarini yuqtirishi mumkin. Adabiyotlardan ma'lumki, I. crassa tuproqda saprotrofik tarzda rivojlana oladi (Moll va boshq., 2016), shuningdek turli xil o'simliklarga ta'sir qiladi, hattoki zambil, zambaklar, jenşen, aspen va olxa kabi o'simliklar ham ta'sir qiladi (1-jadval). bitta). Ko'rinib turibdiki, ko'plab yovvoyi va bog 'o'simliklari I. crassa zaxirasi bo'lishi mumkin. Yuqoridagilar shuni ko'rsatadiki, himoya choralarini ishlab chiqishda ushbu qo'ziqorin bilan kartoshka ildiz mevalariga ta'sir qilish imkoniyatini hisobga olish kerak. Fludioxonil, azoksistrobin va difenokonazolni o'z ichiga olgan kartoshka ildiz mevalarini davolash uchun keng tarqalgan preparatlar I. crassa-ga qarshi yuqori fungitsid samaradorligini ko'rsatdi.
Ushbu ish Rossiya fundamental tadqiqotlar fondi tomonidan qo'llab-quvvatlandi (Grant № 20-016-00139).
Maqola "O'simliklarni himoya qilish byulleteni" jurnalida chop etilgan, 2020 yil, 103 (3)